Electroforesis es una técnica usada en laboratorio para separar y purificar moléculas, usualmente proteínas y ácidos nucleicos. Está basada en la movilidad de los iones en un medio húmedo sometidos a un gradiente eléctrico.
Como se puede ver, los pasos requeridos para realizar una electroforesis son relativamente sencillos de seguir. Preparar la solución, preparar la estaca, colocar la muestra, conectar los electrodos, alimentar el campo eléctrico y recolectar los productos son la secuencia de pasos requeridos para realizar una electroforesis adecuadamente. Esta es una técnica útil que permite separar y purificar distintos compuestos para su posterior análisis.
Pasos requeridos para preparar y realizar una Electroforesis
Paso 1: Preparación de la Solución
Lo primero que debe hacerse para realizar una electroforesis es preparar una solución que contenga los iones a ser separados. Esto está generalmente hecho con el agregado de un buffer adecuado al apropiado para el tipo de molécula que se está separando. El pH del buffer debe ser adecuado para que los iones se separan adecuadamente en los campos eléctricos. Además, la concentración de iones debe ser la adecuada para asegurar que los compuestos se separan con la rapidez deseada.
Paso 2: Preparación de la Estaca
La estaca es el recipiente donde se colocará la muestra para ser sometida a la electroforesis. Dependiendo del tipo de electroforesis a realizar, la estaca puede estar hecha de vidrio, cristal o una matriz polimérica como un gel de poliacrilamida o una membrana de nylon. Las estacas también están preparadas con tampones adecuados para asegurar el buen funcionamiento de la electroforesis.
Paso 3: Colocación de la Muestra
Una vez que la estaca está lista se debe proceder a depositar la muestra dentro. Este procedimiento es a menudo realizado con pipetas automáticas para ayudar con la exactitud. Si se va a usar tipos de electroforesis de matriz, como en campos eléctricos, se deposita una gota pequeña en la esquina central de la matriz. Si se trata de electroforesis de corriente continua, se inserta la muestra en la parte inferior de la estaca.
Paso 4: Conectar los Electrodos
Una vez la muestra está depositada en el recipiente, se procede a conectar los electrodos en los extremos de la estaca. Los electrodos suministran cantidades estáticas de corriente eléctrica para generar el campo eléctrico entre los dos extremos. Estos electrodos generalmente están hechos de polipropileno coagulado con una sola capa para evitar fugas de corriente.
Paso 5: Alimentación del Campo Eléctrico
Finalmente, con los electrodos correctamente conectados a la estaca se debe alimentar un circuito eléctrico a través de ellos. El campo eléctrico generado por la corriente en la estaca arrastra los iones en la solución hacia los extremos. Los iones se van separando de acuerdo a su tamaño y sus cargas. Esto puede realizarse mediante una sesión de electroforesis o controlada por computadora.
Paso 6: Recolección de los Productos
Una vez la concentración de iones en los polos se alcanza, la corriente se corta y los productos se recolectan de los extremos de la estaca. Estos productos son solubles y pueden ser diluidos para su posterior análisis y cuantificación.
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